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支原體培養(yǎng)基 Z1

  • 商品名稱: 支原體培養(yǎng)基 Z1

產(chǎn)品分類:

關(guān)鍵詞:

本產(chǎn)品適用于豬肺炎支原體抗原生產(chǎn),增菌效果好,亦可應(yīng)用于菌種復(fù)蘇活化和CCU檢測(cè)。


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產(chǎn)品詳情


  產(chǎn)品說(shuō)明

  本產(chǎn)品適用于豬肺炎支原體抗原生產(chǎn),增菌效果好,亦可應(yīng)用于菌種復(fù)蘇活化和CCU檢測(cè)。

  本產(chǎn)品血清用量少,利于抗原純化,有助于減少疫苗的動(dòng)物副反應(yīng)。

  配制方法

  1.量取80%終體積的常溫純化水于攪拌容器。

  2.開啟攪拌,將培養(yǎng)基粉未緩慢加入配制容器,攪拌30分鐘至粉末完全溶解定容。

  3使用NaOH溶液將pH值調(diào)至7.8。

  4.先使用0.45 u m孔徑濾芯粗濾,再使用0.22u m孔徑濾芯正壓過(guò)濾,過(guò)濾后2°C-8C避光保存。

  5.不同濾膜材質(zhì)對(duì)培養(yǎng)基組分的截留情況不同,推薦使用PVDF材質(zhì)。

  菌種復(fù)蘇、活化

  1.菌種更換新的培養(yǎng)體系需要適應(yīng)過(guò)程。為保證增菌效果,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)使用支原體培養(yǎng)基Z1對(duì)菌種進(jìn)行兩次以上活化傳代。使用支原體培養(yǎng)基Z1進(jìn)行CCU50檢測(cè)。

  2.培養(yǎng)容器:優(yōu)選透氣瓶、裝液體積應(yīng)不超過(guò)總體積的20%。

  3.復(fù)蘇:將菌種按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C,60rpm振蕩培養(yǎng)至pH下降到7.0-6.8。

  4.活化:將復(fù)蘇后的菌液按照10%體積比接種于含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1中;于37°C,60rpm振蕩培養(yǎng)至pH下降到7.0-6.8,作為種子液。

  CCU50檢測(cè)

  1.稀釋液:含10%-20%豬血清的支原體培養(yǎng)基Z1。

  2.稀釋和培養(yǎng):取數(shù)支已滅菌的2mLEP管,分別加入0.9mL稀釋液備用,取2.100uL菌液加入含0.9mL稀釋液的EP管中,于渦旋混合器上震蕩混勻,依次進(jìn)行10倍稀釋,在稀釋到10-7~10-10稀釋梯度時(shí)每個(gè)梯度做5個(gè)重復(fù)。另取空白培養(yǎng)基作為對(duì)照。將稀釋好的各管按順序排列并做好標(biāo)記,用透明膠帶固定。37°C靜置培養(yǎng)14天。

  3.CCU50計(jì)算:距離比例=(高于50%的累計(jì)變色百分比一50%)(高于50%的累計(jì)變色百分比一低于50%的累計(jì)變色百分比)logCCU50=距離比例X稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)+變色占比>50%對(duì)應(yīng)的稀釋度:

  logCCU50=距離比例×稀釋倍數(shù)的對(duì)數(shù)+變色占比≥50%對(duì)應(yīng)的稀釋度;

表 1CCU50檢測(cè)結(jié)果實(shí)例

Table1ExampleofCCU50testresults

實(shí)驗(yàn)組編號(hào) 稀釋度 變色數(shù) 未變色數(shù) 累積變色數(shù) 累積未變數(shù) 變色占比 距離比 CCU
A 10 7 5 0 13 0 100.00% 0.17 109.17
10 8 5 0 8 0 100.00%
10 9 3 2 3 2 60.00%
10 10 0 5 0 7 0.00%
B 10 7 5 0 14 0 100.00% 0.38 109.38
10 8 5 0 9 0 100.00%
10 9 4 1 4 1 80.00%
10 10 0 5 0 6 0.00%

  4.與傳統(tǒng)的CCU檢測(cè)方法比較,CCU50檢測(cè)方法分辨率更高,結(jié)果更加精確。

  注意事項(xiàng)

  1.為了保證增菌效果,請(qǐng)根據(jù)原有使用習(xí)慣添加血清、輔酶等添加物.

  2.不同菌種來(lái)源,在相同培養(yǎng)基上也會(huì)表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)速度,使用本產(chǎn)品時(shí)培養(yǎng)時(shí)間可能與原培養(yǎng)時(shí)間有所差異,更快或更慢都是正常表現(xiàn)。

  3.首次試驗(yàn)建議取pH7.0、pH6.9、pH6.8進(jìn)行CCU50測(cè)定,以得到最適的收獲時(shí)間點(diǎn)。

  培養(yǎng)效果

菌株 血清用量 CCU 培養(yǎng)時(shí)間
豬肺炎支原體(JM 株) 10%  109CCU/ml 80h
豬肺炎支原體(H 株) 10%  1010CCU/ml 66h
豬肺炎支原體(R 株) 10% 10 10CCU/ml 48h
豬肺炎支原體(田間分離) 25% 109.83CCU/ml 48h
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